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DNA常规测序
 
    华大中生从成立之初至今始终致力于为客户提供高质量的测序服务。目前拥有超过二十位专业技术人员,以及多台ABI3730XL DNA测序仪,每天可进行7000多个测序反应。欢迎惠顾华大中生DNA常规测序服务。
 
一、DNA常规测序服务价格
测序样品或服务
数量
完成期限/工作日
价格(元/反应
质粒DNA和已纯化PCR产物
≤10
3
40.00
10至100
3
35.00
100至300
7
30.00
大量
 
协商
BAC/Fosmid克隆末端测序
 
5
150.00
PCR产物纯化_过膜
 
1
10.00
PCR产物纯化_胶回收
 
1
15.00
质粒DNA提取
 
2
3.00
BAC/Fosmid克隆DNA提取
 
3
100.00
测序引物的设计合成
 
3
1.40元/base(2OD,脱盐纯化)
 
 
二、测序样品要求
1.PCR产物
请提供特异性扩增的产物和特异测序引物并附带相应胶图,PCR产物大小不低于150bp,浓度不低于50ng/ul,体积大于20ul;特异引物浓度不小于5pmol/ul,每个反应提供5ul。未纯化的PCR产物,收取一定的纯化费用。由于纯化方法不同,对测序结果影响较大,故建议提供未纯化PCR产物。
2.质粒菌种
请提供新鲜的菌液或平板,推荐穿刺培养菌株,4℃保存,时间不超过3天;若是菌液,则沉淀菌体体积大于30ul。请注明抗性,每个样品所用的载体,插入片段大小,测序的引物名称,单向或双向测序。对于一般的质粒,本公司提纯质粒后进行DNA测序。如果提供的菌体需特殊培养,或质粒的拷贝数较低时,需收取质粒纯化费,收费标准视具体情况而定。
3.纯化质粒
请标明质粒纯化方法,浓度不低于100 ng/ul,体积大于15ul,溶于纯水而非TE缓冲液。提供信息:每个样品所用的载体,要求测序的引物名称,单向或双向测序,插入片段大小。因为纯化方法不同,可能影响测序质量(酚、氯仿抽提的样品不适于测序),故建议提供菌液。
4. BAC/Fosmid克隆DNA
请提供纯化后的DNA大于5ug,因每个测序反应用量需1ug以上。DNA必须注明浓度,以及DNA提取纯化的方法。另请提供浓度大于5pmol的引物10ul以上。若提供克隆的菌液,则需收取克隆DNA提取费用。
 
三、PCR产物测序注意事项
1. PCR产物的纯度是PCR产物直接测序成功的关键,所以我们提倡切胶回收PCR产物。如果有几条PCR产物长度相近,用电泳胶也无法分开,此时的PCR产物便无法直接测序。这种情况建议把PCR产物克隆后测序。
2. 引物特异性是PCR产物直接测序成功的另一重要要因, PCR反应的引物不一定就适合测序。测序用引物要求较高,引物的3′端必须与模板完全匹配,含有Mix碱基的引物一般不能测序 (特别是3′端)。此外,测序引物长度一般为20个碱基左右,GC含量必须在50 ~ 60%左右。而且,用于测序的引物一定要纯,纯度必须大于90%。
3. 复杂片段:扩增后的PCR带较弱的PCR产物在测序时一般成功率较低。
4. 短片段测序:小于150 bp的PCR产物直接测序效果不好,请克隆后测序。
 
四、测序用引物说明
1、客户自备引物的说明
提供序列:需要我们合成时,需收取DNA合成费用。
自备引物:请提供浓度正确,且浓度大于5pmol/ul的引物20ul以上,并注明引物序列。
引物长度:宜在20个碱基左右,不要使用包含兼并碱基的引物(尤其是3‘端)。
特殊引物:荧光引物以及特殊标记引物不能用于测序。
引物纯度:必须大于90%。
2、本公司免费提供常用通用测序引物。
 
五、测序结果说明
1.发送方式:测序完成后,我们通过Email发给客户序列文件和彩色峰形图谱,大量测序结果采用光盘形式提供。
2.查阅峰图:推荐使用Chromas软件查看峰图文件。
3.查阅序列文件:序列文件为纯文本文件,可用记事本或写字板打开。
4.可靠长度:一个正常的成功反应,能保证测序峰形清晰的长度为600bp(通常为700-800bp)。
5.低质量区域:紧接着引物后面的30bp左右的序列不一定能完全读清楚。
6.特殊序列结构:由于DNA序列具有特殊结构,测序反应有时候会出现信号中断的情况,这些结构包括但不限于:G/Ccluster、PolyN、二级回文结构等;此外由于DNA结构中的重复序列,造成测序引物和模板有二个以上的结合位点,导致出现套峰现象。以上情况由于DNA结构或序列原因造成,我们会根据具体情况收取相应费用。
7.样品保存:客户样品和引物,我们一般会保存一个月,在这个期限内客户可对样品进行补测,或者提出返回样品。超过该期限的样品我们会进行销毁,并不另行通知客户。
8.严格保密:本公司对客户的样品情况以及测序结果保证严守秘密。
 
 
六、常见问题
详细请见本公司网站。

七、订单下载(点击下面文字即可)
DNA测序订单_质粒&菌液;
DNA测序订单_PCR产物
   

北京华大中生科技发展有限公司
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