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荧光差异双向电泳技术(DIGE)

DIGEDifferential in gel electrophoresis)技术是经典2D(双向)电泳技术的成熟与完善,通过三色荧光染料分别对内标和生物样本进行标记,极大地提高了结果的准确性,可靠性和重复性。能够在一张2D胶上对两个样本的多种蛋白质进行分离,并分别单独成像,应用专用软件分析图像,得到蛋白表达量的丰度变化,根据数据分析结果准确地发现差异蛋白。DIGE技术可检测到样品间小于10%的蛋白表达差异,统计学可信度达到95%以上。

 


一、服务内容

1、预实验:包括细胞或组织样品蛋白质提取、定量,7cm小胶2D测试。

2、正式实验:荧光标记,一维IEF、胶条平衡、二维SDS-PAGE

3、扫描,胶图分析

4、切点,质谱分析。
 


二、技术路线





三、样品要求

1、细胞样品

a、数量:确保每组样品的细胞数量在108 以上,如需要进行多批实验,则数量也需相应增加;分装成3-4份。

b、清洗和收集:将细胞培养至所需数量后,弃去培养基,加入Salt-free的清洗液(250mM 山梨醇,20mM Tris-HCl pH 7.4)对细胞进行三次以上的漂洗【对于贴壁培养的细胞,可在倒掉培养基后将清洗液直接加入培养瓶中轻柔摇动后弃去上清;对于悬浮培养的细胞,可温和离心后弃去培养基,再加入清洗Buffer重悬细胞】,悬浮培养的细胞可直接弃去清洗液后保存,贴壁培养的细胞建议清洗后用机械方法将细胞刮下,加少量清洗液以便收集;

c、保存和运送:将充分清洗过的细胞温和离心收集,尽量去除残留的上清(如有条件,可使用冻干设备),迅速置于液氮中保存(注意:需使用细胞冻存管,勿用普通离心管);运送样品时,最好将样品置于便携式液氮罐中,或也可将样品置于干冰中,不要使用普通冰袋运送样品;

2、组织样品

取纯净的目的组织,无血或者其他组织的污染,切成薄片,在250mM 山梨醇,20mM Tris,pH7.4的缓冲液清洗组织,100mg每管分装。液氮冻存或者-80℃保存。每个样品送3-4份;

3、需要提供的数据:样品的数量,收集方法,保存和运送方法。

4、如果样品有毒性或有致病危险,务必事先声明。

 


四、价格周期

条目

服务内容

价格

(人民币元)

周期

(工作日)

普通2D样品制备

提取出的蛋白质、蛋白质定量结果, SDS-PAGE(7cm)检测结果。

800.00/样

5天

7cm双向电泳

预实验,条件摸索。

800.00

5天

DIGE荧光双向电泳

包括荧光标记,等电聚焦,胶条平衡,SDS-PAGE,扫描,分析。

12000.00

15天

18cm双向考染分析胶

包括等电聚焦,胶条平衡,SDS-PAGE,考染、扫描,提供双向胶以及胶图

1100.00

5天

胶图分析

DeCyder 2D软件分析图像

2500.00/胶

5天

肽指纹图谱分析(PMF

肽指纹图谱、国际数据库检索结果

500.00/点

2天

MALDI-TOF-TOF-MS鉴定

肽指纹图谱、二级质谱图、手动搜索1-3肽段。

1300.00/点

3天

LC/MS/MS

蛋白质混合物(少于10种蛋白质)

2000.00/点

5天

 


五、提供结果

     
1、实验流程报告。
     2、胶图以及分析结果。

     3、剩余实验样品(如有)。
   

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