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双向电泳

     双向电泳是(2D)是一种分析从细胞、组织或其他生物样本中提取的蛋白质混合物的有力手段,已得到广泛应用,是蛋白质组学的基本方法。这项技术通过两个步骤分别从两个方向的电泳分离蛋白混合物:第一步为等电聚焦(IEF),即根据蛋白质的等电点(PI)差异将蛋白质分离。第二步为十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE),即利用蛋白质的分子量(Mr, 相对分子量)差异将蛋白质分离。双向凝胶电泳结果中的每个斑点都对应着蛋白混合物中的一种蛋白。因此,可将上千种不同的蛋白质分离开来,并得到每种蛋白质的等电点、表观分子量和含量等信息。

 


一、服务内容

1、预实验:包括细胞或组织样品蛋白质提取、鉴定,7cm小胶2D测试。

2、正式实验:不同大小的一维IEF、胶条平衡、二维SDS-PAGE

3、染色:考染或银染。

4、扫描胶图分析

5、切点,质谱分析

 


二、样品要求

1、细胞样品

a、细胞数量:确保每组样品的细胞数量在108 以上,如需要进行多批实验,则数量也需相应增加;分装成3-4份。

b、清洗和收集:将细胞培养至所需数量后,弃去培养基,加入Salt-free的清洗液(250mM 山梨醇,20mM Tris-HCl pH 7.4)对细胞进行三次以上的漂洗【对于贴壁培养的细胞,可在倒掉培养基后将清洗液直接加入培养瓶中轻柔摇动后弃去上清;对于悬浮培养的细胞,可温和离心后弃去培养基,再加入清洗Buffer重悬细胞】,悬浮培养的细胞可直接弃去清洗液后保存,贴壁培养的细胞建议清洗后用机械方法将细胞刮下,加少量清洗液以便收集;

c、保存和运送:将充分清洗过的细胞温和离心收集,尽量去除残留的上清(如有条件,可使用冻干设备),迅速置于液氮中保存(注意:需使用细胞冻存管,勿用普通离心管);运送样品时,最好将样品置于便携式液氮罐中,或也可将样品置于干冰中,不要使用普通冰袋运送样品;

2、组织样品

取纯净的目的组织,无血或者其他组织的污染,切成薄片,在250mM 山梨醇,20mM Tris,pH7.4的缓冲液清洗组织,100mg每管分装。液氮冻存或者-80℃保存。每个样品送3-4份;

3、需要提供的数据:样品的数量,收集方法,保存和运送方法。

4、如果样品有毒性或有致病危险,务必事先声明


三、价格周期

 

条目

服务内容

价格

(人民币元)

周期

(工作日)

普通2D样品制备

提取出的蛋白质、蛋白质定量结果, SDS-PAGE(7cm)检测结果。

800.00/样

5天

特殊2D样品制备

提取出的蛋白质、蛋白质定量结果, SDS-PAGE(7cm)检测结果

协商

5-10天

7cm双向电泳

包括等电聚焦,胶条平衡,SDS-PAGE,考染、扫描,提供双向胶及胶图

800.00

5天

13cm双向电泳

包括等电聚焦,胶条平衡,SDS-PAGE,考染、扫描,提供双向胶及胶图

900.00

5天

18cm双向电泳

包括等电聚焦,胶条平衡,SDS-PAGE,考染、扫描,提供双向胶以及胶图

1100.00

5天

24cm双向电泳

包括等电聚焦,胶条平衡,SDS-PAGE,考染、扫描,提供双向胶及胶图

1200.00

5天

胶图分析

包括胶的描点、平行胶之间的分析比对和样品间虚拟胶的比对分析

400.00/胶

1块胶/

切点

切下回收的双向电泳胶点

50.00/点

1天

胶内酶解

酶解以后的溶液

200.00/点

3天

肽指纹图谱分析(PMF

肽指纹图谱、国际数据库检索结果

500.00/点

2天

MALDI-TOF-TOF-MS鉴定

肽指纹图谱、二级质谱图、手动搜索1-3肽段。

1300.00/点

3天

De novo 测序

肽指纹图谱、二级质谱图、手动测序1-3个肽段,de novo分析结果。

4000.00/点

4天

LC/MS/MS

蛋白质混合物(少于10种蛋白质)

2000.00/点

5天

说明:

1、 对特殊样品,可能进行预实验以保证样品制备和双向电泳的效果,不论预实验结果如何,样品制备预实验收费800元,双向电泳7cm预实验收费800元。

2、双向电泳价格为考染价格,如需银染每块胶加收100元。

3、如同时做双向电泳和质谱鉴定,免收切点费。

4、以上所列为全部涉及的实验内容,可根据课题设计,选择项目实际需要的实验内容,费用根据实际内容计算。

 


四、提供结果

      
1、实验流程报告。
       2、胶图以及分析结果。

       3、剩余样品(如有)。
   

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